Microscopía de fluorescencia de súper resolución co-localizada simultánea y microscopía de fuerza atómica: plataforma combinada SIM y AFM para las ciencias de la vida.

La correlación de datos de diferentes técnicas de microscopía tiene el potencial de descubrir nuevas facetas de los eventos de señalización en biología celular. * En el artículo "Microscopía simultánea de fluorescencia de superresolución de alta resolución simultánea y microscopía de fuerza atómica: plataforma combinada SIM y AFM para las ciencias de la vida" Ana I. Gómez-Varela, Dimitar R.
Stamov, Adelaide Miranda, Rosana Alves, Cláudia Barata-Antunes, Daphné Dambournet, David G. Drubin, Sandra Paiva y Pieter AA
De Beule informan por primera vez de una configuración de hardware capaz de lograr imágenes simultáneas co-localizadas de fluorescencia de súper resolución de campo lejano correlacionada espacialmente microscopía y microscopía de fuerza atómica, una hazaña obtenida hasta ahora por configuraciones de microscopía de fluorescencia con resolución espacial restringida por el límite de difracción de Abbe. * Los autores detallan la integración del sistema y demuestran el rendimiento del sistema utilizando perlas fluorescentes de baja resolución y aplicadas a una muestra de prueba que consiste en células epiteliales de osteosarcoma óseo humano, con el transportador de membrana plasmática 1 (MCT1) etiquetado con una proteína fluorescente verde mejorada (EGFP) en el N -terminal.* La operación simultánea de AFM y la técnica de microscopía de fluorescencia de súper resolución proporciona una poderosa herramienta de observación en la nanoescala, aunque la adquisición de datos suele estar obstruida por una serie de problemas de integración.
Los autores del artículo mencionado anteriormente creen que la combinación de SR-SIM con AFM presenta uno de los esquemas más prometedores que permiten imágenes simultáneas co-localizadas, permitiendo el registro de datos nanomecánicos y la visualización de la dinámica celular al mismo tiempo. * Para mediciones en células en sondas líquidas NANOSENSORS ™ uniqprobe qp-BioAC-CI AFM (CB1) con una frecuencia de resonancia nominal de 90 kHz (en el aire), constante de resorte de 0.3 Nm − 1, recubrimiento parcial de oro en el lado del detector y cuarzo se utilizaron puntas hiperbólicas simétricas circulares simétricas (doble cóncavo) con ROC de 30 nm. Las áreas AFM correspondientes para las imágenes celulares se adquirieron con una velocidad en voladizo Z de 250 μms − 1 a una longitud Z máxima de 1,5 μm, lo que resulta en un tiempo de adquisición (basado en el número de píxeles) para las Figs. 2, 3, 4 de ca.
13, 8 y 15 min respectivamente. * Figura 4 ayb de Ana I. Gómez-Varela et al. “Microscopía de fluorescencia de superresolución de ubicación conjunta simultánea y microscopía de fuerza atómica: plataforma combinada SIM y AFM para las ciencias de la vida: adquisición simultánea de SR-SIM / AFM.
Las mediciones de AFM se llevaron a cabo en células U2OS fijas en medio / tampón con (a) y sin iluminación N-SIM (b). Para mayor comodidad y contraste de características / ruido mejorado, ambas imágenes de topografía AFM en las superposiciones SR-SIM / AFM se muestran con un algoritmo de detección de bordes utilizando un operador de diferencia de píxeles en X. Las imágenes de topografía de la superficie de la placa de Petri en tres posiciones (etiquetadas en el figuras) fueron planefit (función polinómica de primer orden) para compensar las inclinaciones en la superficie de la muestra y sometidas a análisis de rugosidad de la superficie.
Por favor, eche un vistazo al artículo completo para ver la figura completa. https://rdcu.be/b4Iot * Ana I.
Gómez-Varela, Dimitar R. Stamov, Adelaide Miranda, Rosana Alves, Cláudia Barata-Antunes, Daphné Dambournet, David G. Drubin, Sandra Paiva y Pieter A.
A. De Beule Microscopía de fluorescencia de súper resolución co-localizada simultánea y microscopía de fuerza atómica: plataforma combinada SIM y AFM para las ciencias de la vida. Nature Scientific Reports volumen 10, número de artículo: 1122 (2020) DOI: https://doi.org/10.
1038 / s41598-020-57885-z Siga este enlace externo para leer el artículo completo https://rdcu.be/b4Iot Acceso abierto: El artículo "Microscopía de fluorescencia de superresolución de ubicación conjunta simultánea y microscopía de fuerza atómica: plataforma combinada SIM y AFM para las ciencias de la vida" por Ana I. Gómez-Varela, Dimitar R.
Stamov, Adelaide Miranda, Rosana Alves, Cláudia Barata-Antunes, Daphné Dambournet, David G. Drubin, Sandra Paiva y Pieter AA
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